从手动研磨到批量样品同步研磨,多样品组织研磨仪的真实使用体验
说出来不怕大家笑话,我前两年一直靠手动研磨处理组织样本。一个小鼠肝脏,剪碎了放在研钵里加液氮敲,敲到胳膊酸才算完。一次做20个样,光研磨就能磨掉我一整个上午,下午还得继续提RNA,整个人是懵的。后来实验室买了上海净信的Tissuelyser系列多样品组织研磨仪,真的是省事了好多,实验效率都提高了很多,在也没有之前的烦扰了。我们现在已经用了快一年了,今天就给聊聊我的真实感受,优点缺点都不藏着,想入手的同学可以参考。
上海净信多样品组织研磨仪之前手动研磨的日子:要有崩溃就有多崩溃
我们实验室主要做小鼠组织的RNA提取和蛋白分析,一次实验通常要处理10到20个样本。没有多样品研磨仪之前,流程是这样的先拿研钵,倒液氮,放组织,用研杵敲碎,再研磨成粉,刮出来转到离心管里。一个样本快的话三五分钟,慢的话十分钟都磨不匀——特别是脑组织那种又软又韧的,敲半天还是一粒一粒的。
更头疼的是中间的清洗。研钵用完要洗,洗了还要烤干或者高压灭菌,不然下一个样本交叉污染就完了。20个样本下来,光清洗研钵就能花掉很多时间。冬天还好,夏天在实验室戴着口罩手套搞液氮,一身汗,味道也不好闻。
后来试过单管电动匀浆器,比手动快一点,但也就快一点。一个一个磨,每磨完一个也要洗刀头,超声洗酒精擦,一套流程下来时间也没省多少。而且刀头式匀浆器做RNA提取的时候,产热比较厉害,夏天磨着磨着样本就升温了,RNA降解的风险不小。那段时间我做出来的qPCR结果重复性一直不好,后来才怀疑是研磨环节的问题。
多样品组织研磨仪上手后的变化:一次24管是什么体验
实验室买的是上海净信Tissuelyser-24L多样品组织研磨仪,24个2ml样品管的位。刚开始用的时候其实也没抱太大期望,觉得能比手动快就行。结果把24个管子放到适配器里,盖好盖子,设好频率和时间,按开始——嗡嗡嗡大概一分钟,打开一看,组织全磨成粉了,还均匀得很。
那天下午我处理了之前要磨一整天的样本,不到半小时就全部搞定。不是那种快了一点点的感觉,是直接把整个实验流程的时间砍了一大半。以前我一周花两三天在研磨上,现在一天就能把一周的样本全磨完。
批量样品研磨后来查了一下这款研磨仪的参数,Tissuelyser-24L的均质速度是0到70Hz,相当于每分钟振荡300到4000次,出料粒径大概5微米。这些数字我一开始也没什么概念,实际用下来就是小鼠肝脏、脾脏、肺这些软组织样品,30秒到1分钟就能磨得很细;骨头、牙齿这种硬组织,配大一点的研磨球,时间长一点也能搞定。我们实验室常做的是软组织,一分钟以内全部搞定没问题。
研磨球怎么选:踩过的坑
刚开始用的时候我随便抓了一把不锈钢球丢进去,结果磨出来的效果不太稳定——有的管子磨得很细,有的还有小颗粒。后来跟厂家技术支持聊了才知道,研磨球不是随便放的,大小和数量都是有讲究的。
上海净信的研磨球材质有好几种:不锈钢、铬钢、氧化锆、碳化钨、石英砂,直径从0.1毫米到30毫米都有。我后来摸索出来的经验是:离心管做小鼠软组织,放一颗不锈钢球基本够用。如果是植物种子这种硬一点的东西,换氧化锆球,硬度高,磨损也小。做金属离子相关的实验就别用不锈钢了,氧化锆或者石英砂更合适。
数量上也不是越多越好。一开始我贪多放了两三颗,结果管子里挤得太满,研磨效果反而下降。后来问了技术支持,说一般一颗大球加两颗小球效果比较好。这个具体怎么配,还是要拿自己的样本试几次,别人说的都是参考。
液氮冷却:做RNA提取的救星
做RNA提取的人都知道,常温研磨摩擦产热有多要命。上海净信多样品组织研磨仪Tissuelyser-24L本身可以升级液氮冷冻适配器,我们实验室后来加了这个模块。做法是把适配器先泡在液氮里预冷,然后迅速放样本、放研磨球、装到机器上跑。
低温研磨的主要好处就是抑制RNA酶活性,同时让组织变脆更容易磨。以前常温研磨做RNA,提出来的RNA经常有降解,跑胶能看到拖尾。用了液氮冷却之后,RNA完整性好了不少,qPCR的Ct值重复性也跟着好了。这个变化对我来说是很实在的——之前做了好几个月重复性差的数据,换了低温研磨之后问题解决了大半。
不过液氮操作要小心。适配器从液氮里拿出来的时候温度很低,一定要戴防冻手套,别直接用手碰。放样本和装研磨球的动作要快,不然适配器回温了效果就打折扣。刚开始用的时候手忙脚乱,操作个三五次就熟练了。
噪音和清洁:实际使用细节
买之前我最担心的就是仪器的噪音问题,毕竟我们的实验室房间不大,人也多。Tissuelyser-24L标称噪音小于55分贝,实际用下来确实不算吵。开机的时候是嗡嗡的低频声,不是那种尖锐刺耳的声音。隔壁工位的同学一开始还问我买了什么新设备,说没怎么听到声音。
清洁方面比我想象的省心。因为用的是一次性离心管,样本和研磨球都封在管子里,仪器本身基本不会脏。适配器拿出来用酒精擦一擦就行,内腔是不锈钢的,擦一下就干净。不用像刀头式匀浆器那样每次用完还要拆刀头洗,省了不少麻烦。
说点这款研磨仪的缺点吧
一、如果你今天只需要磨一两个样本,把适配器拿出来放两个管子,剩下的孔位空着,其实也能用,但总觉得有点大材小用。就像你为了一个人专门开一辆大巴车,虽然能开,但不太划算。这种时候用手动研磨或者单管匀浆器反而省事。
二、研磨条件需要自己摸索。不是说把管子放进去按个键就万事大吉了。不同组织的硬度、韧性差别很大,不同的样品所需要应用的研磨程序参数也都是不一样的。我们实验室刚开始用的时候废了好几个样本才摸出合适的参数。这个过程急不来,建议先拿便宜的样本练手,或者不懂的也可以直接联系净信的技术人员进行咨询解决,我们前期也是咨询的,它们家的技术人员还是很靠谱的!
上海净信多样品组织研磨仪适合谁、不适合谁
先说说我的判断,供大家参考。
适合买的情况:你或者你们实验室经常需要一次处理十几或者上百个以上的生物样本,做核酸提取、蛋白分析、代谢组学这类批量前处理。动物组织、植物样本、微生物样本都适用。如果你每周有三四天都在做样本研磨,那这台研磨仪设备能帮你省大量时间,性价比很高。
不太适合的情况:你一个月就做一两个样本,而且量都不大。这种情况下买个手动研钵或者小型匀浆器就够了,没必要上多样品研磨仪。另外如果你主要做的是液体样本的均质,比如细胞悬液打散,那超声破碎仪或者高压均质机可能更对口。
预算建议
如果实验室决定要买,我的建议是先买基础款,别一上来就顶配,但这个也要根据你的实验室样品来看,看你的样品性质和研磨需求来决定你选择的研磨仪型号。上海净信Tissuelyser系列多样品组织研磨仪有24L、32L、48L、64L、96L、192L等多种配置,刚开始用24L或者32L基本够了。等实验量上去了再换大的适配器也是可以的。
液氮冷冻模块可以后配,不是必须一开始就买。如果你做的实验对温度不敏感,常温研磨先用着也没问题。做RNA提取或者热敏样品的时候再加制冷模块,这样初期投入压力小一些。
研磨球多买几种材质备着,不锈钢球常用,氧化锆球备用,花不了多少钱但能覆盖更多样本类型。
我们已经用了上海净信的这台多样品组织研磨仪近一年了,它确实解决了我之前头疼的批量样品研磨效率和重复性的问题。
如果你的实验场景它想匹配,那这笔钱花得值。如果只是偶尔做一两个样本,那就别跟风买了,适合自己的才靠谱。
