小鼠肝脏单细胞制备总翻车？这台单细胞悬液制备仪帮了大忙

做单细胞实验的人都知道，真正决定实验成败的，很多时候不是测序平台，也不是分析软件，而是最容易被忽略的前处理环节。特别是在组织样本制备阶段。样本解离不充分，后面得到的不是单细胞悬液，而是一堆细胞团块；解离过度，又容易造成细胞破损、活率下降。无论是哪种情况，都会直接影响后续实验结果。

我们课题组最近在开展小鼠肝细胞相关研究，需要将肝脏组织制备成高质量单细胞悬液，用于细胞活率检测以及后续实验分析。这个过程中，尝试过不少传统方法，也踩过不少坑。直到后来使用了上海净信的单细胞悬液制备仪之后，整个实验流程才逐渐稳定下来。今天就结合实际使用过程，聊聊组织解离这件事。

上海净信单细胞悬液制备仪

为什么组织解离总是出问题？

很多刚接触单细胞实验的人会觉得把组织打散不就行了吗？可真正开始做实验后才发现，远没有想象中的简单。我们就以我们实验组这次做的肝脏样品为例。

肝细胞本身比较脆弱。如果机械力过大，很容易造成细胞膜损伤。如果处理力度不足，又会残留大量组织碎片。这两种情况都会影响最终结果。

我们最开始采用的是人工剪碎配合移液枪反复吹打的方法。虽然设备要求不高，但操作过程非常依赖经验。力度稍微大一点，细胞活率就会下降；力度不够，组织又无法完全解离。同一个实验，不同实验人员操作，结果经常出现明显差异。对于需要重复验证的数据来说，这显然不是理想状态。后来尝试了酶解+摇床的解决方案，为了解决人工操作带来的实验问题，我们还尝试过酶解配合水浴摇床的方法。

相比手工吹打，确实减少了部分人为干扰。但新的问题又出现了。首先是温度控制，组织消化对于温度要求比较严格，温度偏高或者偏低都会影响酶活；而普通水浴摇床温控精度有限，长时间运行过程中容易出现波动。

其次是样品处理效果的一致性。多个样品同时处理时，经常会出现有的样品已经消化完成，有的样品仍然存在组织残留，批次之间重复性并不理想。随着课题组样品量逐渐增加，这种方法已经很难满足实验需求。

上海净信的单细胞悬液制备仪

为什么开始考虑单细胞悬液制备仪？

为什么开始考虑单细胞悬液制备仪？最直接的原因就是效率。过去一个实验往往需要全程盯着。从剪碎、酶解到吹打、过滤，每一步都需要人工参与。不仅耗费时间，而且实验结果容易受到人为因素影响。后来接触到单细胞悬液制备仪后，我们最关注的并不是自动化，而是温控能力和解离效果。因为对于单细胞实验来说，稳定的消化环境比单纯提高速度更重要。

单细胞悬液制备仪的实际使用过程怎么样？

第一次上手时，最大的感受就是操作逻辑比较清晰。设备的体积不大，放在实验台上即可使用。控制界面简单直观，常用程序已经预先设置好。

在实验开始前需要提前解冻消化酶，设备完成预热，随后获取小鼠肝脏组织并进行清洗。将样品剪碎后加入消化管，同时加入约消化酶。接下来基本不需要额外干预。启动设备进行预热，按照设定程序完成组织解离过程。整个过程相比传统方法轻松不少。实验人员不需要频繁观察或者反复吹打。

单细胞悬液制备仪对肝脏组织样品的解离效果到底怎么样？

单细胞悬液制备仪对肝脏组织样品的解离效果到底怎么样？这是大家最关心的问题。程序结束后，我们将消化液转移至离心管，并按照比例加入终止液。随后进行镜检观察。

相比之前使用传统方法处理的样品，变化非常明显。首先是细胞分散状态，显微镜下几乎看不到明显组织团块，细胞分布更加均匀。其次是细胞完整性，肝细胞形态保持较好，没有出现大量破碎细胞，对于后续活率检测来说，这一点尤其重要。因为细胞状态越完整，检测结果越具有参考价值。